Ar.A4感受态细胞

简要描述：

更新时间：2022-12-08

厂商性质：生产厂家

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详情介绍

品牌	自营品牌	货号	BFNC86119
规格	10x100ul/50x100ul/100x100ul	供货周期	现货
主要用途	仅用于科研	应用领域	医疗卫生,生物产业

Ar.A4克隆感受态细胞

产品规格CAT#: BFNC86119-01(10×100ul)/BFNC86119-02(50×100ul)/BFNC862119-03(100×100ul)
Ar.A4： 100μl/支
pK7WGF2（control vector，10ng/μl ) 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（12个月）

基因型

Agrobacterium rhizogenes(kanR ) Ar A4 Ri(agropine type)

产品说明

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（玉米，烟草，胡萝卜，甘草等），同时具有卡那霉素抗性。

青旗生物生产的Ar.A4感受态细胞经特殊工艺制作，pK7WGF2质粒（壮观霉素抗性）检测，转化效率>104 cfu/μg DNA。

常规操作方法

1.取-80℃保存的Ar A4发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。

2.每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率较高，*使用前尽量做预实验确定所加质粒的量），用手快速、剧烈bo打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。

3. 冰浴中拿出放室温，加入700μl 无抗生素的TY 液体培养基，于 28℃振荡培养 2小时。

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天

● 农杆菌相关抗生素配方：

抗生素	配方	原液	工作液
羧苄青霉素 (carb)	双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	50 mg/ml	50 μg/ml
硫酸卡那霉素 (kan)	双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	50 mg/ml	50 μg/ml
链霉素 (strep)	双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	10 mg/ml	50 μg/ml
利福平 (rif)	DMSO溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	10 mg/ml	20 μg/ml
庆大霉素 (gent)	双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	20 mg/ml	40 μg/ml
氯霉素（cam）	无水乙醇溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	34 mg/ml	34 ug/ml

常用农杆菌抗性： (R：抗；S：敏感。)

农杆菌菌株	羧苄青霉素(carb)	链霉素(strep)	利福平(rif)	氯霉素(cam)	硫酸卡那霉素(kan)
Ar.A4	S	S	S	S	R
MSU440	S	R	S	S	S
Ar.Qual	S	R	S	R	S
C58C1	S	R	R	S	S
ATCC15834	S	S	S	S	S
K599	S	R	S	S	S
Ar.1193	R	R	R	S	S

● TY配方（1L）：

Tryptone 5g

Yeast extract 3g

补水到1L体积，*溶解后，121度、20分钟高温灭菌

配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌

每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。

若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。

注意事项

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

2. 混匀质粒时应用手指快速bo打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。

4. Ar.A4具有卡那霉素抗性，不可用于具有卡那霉素抗性质粒的转化。

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