BL21 Star（DE3）pLysS​感受态细胞

BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞

产品规格CAT#: BFNC86071-01(10×100ul)/BFNC86071-02(50×100ul)

BL21 Star(DE3)pLysS： 100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl

保存条件(保质期)： -80℃（6个月）

基因型

F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^- ) gal dcm rne131 (DE3)pLysS (Cam^R)

产品说明

BL21 Star(DE3)pLysS菌株来源于BL21(DE3)，含有rne131突变（RNaseE基因），RNaseE基因的突变降低了內源RNase的积累，增强菌株细胞内mRNA的稳定性，从而提高异源蛋白的表达水平。主要适用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达，同时含有大肠杆菌RNA聚合酶，也可用于非T7启动子表达载体（pGEX，pMAL等）的蛋白表达。由于BL21 Star(DE3)菌株的异源基因基础表达水平较高，所以不适合毒性蛋白的表达。BL21 Star(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性。pLysS含有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。pLysS质粒含有p15A复制起始子，可以和含有 pUC或pBR322等复制起始子的质粒兼容。

青旗生物生产的BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达10⁷ cfu/μg DNA。

操作方法

1. BL21 Star(DE3)pLysS 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手bo打EP管底轻轻混匀，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞

IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。

5. 为获得需要量的蛋白，诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

6. BL21 Star(DE3)pLysS 菌株携带 pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素，以防质粒丢失。